ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ತತ್ವಗಳು

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಘನ ಹಂತದ ಸಿಯಾಲಿಕ್ ಅಮೈಡ್ ಟ್ರೈಗ್ಲಿಸರೈಡ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆ ಮೂಲಕ ಡಿಎನ್‌ಎಯ 3′ ಅಂತ್ಯವನ್ನು ಘನ ಹಂತದ ತಲಾಧಾರದ ಮೇಲೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು 3′ ರಿಂದ 5′ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸುವವರೆಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. .ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಅನ್ವಯದಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ.

ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮೊದಲ ಬೇಸ್‌ನ 3′ ಅಂತ್ಯವನ್ನು CPG ಯಲ್ಲಿ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮುಂದಿನ ಬೇಸ್‌ನ 5′-OH ಅನ್ನು ಡಿ-ಪಿ-ಟೋಲಿಲ್ ಟ್ರಿಟಿಲ್ DMT ಯಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಬೇಸ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಅಮೈನೋ ಗುಂಪನ್ನು ಬೆಂಜೊಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು 3′ ನಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ. -OH ಅನ್ನು ಅಮೈನೊ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಸಂಯುಕ್ತದೊಂದಿಗೆ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.1 ಬೇಸ್‌ನ 5 5′-OH ನ 1 ಬೇಸ್ ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ಬೇಸ್‌ನ 3′-OH ಒಂದು ಫಾಸ್ಫೈಟ್ ಟ್ರೈಗ್ಲಿಸರೈಡ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ, ಅದು ನಂತರ ಅಯೋಡಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಟ್ರೈಗ್ಲಿಸರೈಡ್‌ಗೆ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಎರಡನೇ ಬೇಸ್ 5′-OH ಮೇಲಿನ ರಕ್ಷಕವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ ಡೈಕ್ಲೋರೊಅಸೆಟಿಕ್ ಆಸಿಡ್ DM ಚಕ್ರಗಳನ್ನು ಮುಂದಿನ ಬೇಸ್ ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸೇರಿಸುವುದು, ಮತ್ತು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ನಂತರ 5′-OH ಮೇಲಿನ ರಕ್ಷಕವನ್ನು ದುರ್ಬಲ ಆಮ್ಲದೊಂದಿಗೆ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಘನ ರಾಳದಿಂದ ತುಣುಕನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದ ಅಮೋನಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕ ಕಡಿತಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ರಕ್ಷಕವನ್ನು ಬೇಸ್‌ನಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ತಾಪನದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ಅಮೋನಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ನೊಂದಿಗೆ, ಅಮೋನಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ತುಣುಕನ್ನು ನಿರ್ವಾತ ಒಣಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ದ್ರವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಅಥವಾ PAGE ಮೂಲಕ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಒಲಿಗೊ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಹಂತಗಳು

ಡಿಬ್ಲಾಕಿಂಗ್

ದಿTCA ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ 5 ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ DMT ರಕ್ಷಿಸುವ ಗುಂಪನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ

ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಅನ್ನು ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಮಾನೋಮರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಿ ಸಕ್ರಿಯ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಮಾನೋಮರ್ ಮಧ್ಯಂತರವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.

ಜೋಡಣೆ

5-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಲ್ ಗುಂಪು ಅಸ್ಥಿರವಾದ ಫಾಸ್ಫೈಟ್ ಟ್ರೈಗ್ಲಿಸರೈಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಆಂಟಿ-ಜನರೇಟಿವ್ ಕಂಡೆನ್ಸೇಶನ್ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಮಧ್ಯಂತರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ.

ಕ್ಯಾಪಿಂಗ್ 

ಕ್ಯಾಪಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ನ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಘನೀಕರಣ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಭಾಗಿಯಾಗದ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಲ್ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಸಿಟೈಲೇಷನ್ ಕ್ಯಾಪಿಂಗ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ.

ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣ 

ನೀರನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಯೋಡಿನ್ ದ್ರಾವಣದ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣದ ಮೂಲಕ ಅಸ್ಥಿರವಾದ ಫಾಸ್ಫೈಟ್ ಬಂಧಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾದ ಫಾಸ್ಪರಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಟ್ರೈಗ್ಲಿಸರೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತದೆ.

ಸೈನೋಇಥೈಲ್ ಸೀಳು

ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ನಂತರ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನ, ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಟ್ರೈಗ್ಲಿಸರೈಡ್ ಬಂಧದಿಂದ ಸೈನೋಇಥೈಲ್ ಗುಂಪನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು DEA ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಸೀಳು ಮತ್ತು ಡಿಪ್ರೊಟೆಕ್ಷನ್

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ಅಮೋನಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಘನ ಹಂತದ ವಾಹಕದಿಂದ ಸೀಳಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಬೇಸ್ಗಳ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುವ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಬಿಸಿಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.